产品规格参数
DH5α： 50μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件： -80℃
保质期： 6个月
基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
产品说明
DH5α菌株是分子生物学实验室最常用的感受态细胞。该菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；另外，重组酶缺陷型 (recA)减少了插入片段的同源重组概率，保证其稳定性；lacZΔM15使DH5α可用于蓝、白斑筛选。本公司DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，保证了pUC19质粒检测转化效率>1×1010 cfu/μg DNA，可用于cDNA文库的构建。
操作方法（电穿孔法）
1. DH5α电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用热激法进行转化。质粒等DNA产物需去离子水溶解配制（避免含有酚、乙醇、盐离子、蛋白及去污剂等污染），避免使用elution buffer、tris buffer、TE buffer等含盐溶液溶解DNA，否则易导致转化效率降低及电弧放电。
2. 取一直径为0.1cm电击杯（如Bio-Rad #1652083或BTX ECM630等类似产品），插入冰中静置5分钟以充分预冷。与此同时从-80℃取出保存的DH5α电击感受态细胞，冰中5 分钟融化，随后立即加入目的DNA并用食指轻拍EP管底混匀(避免使用移液器吹打)后立即插回冰中。
3. 于一洁净操作区域使用移液器将上述感受态混合物迅速移入电击杯中，避免吹出气泡，盖回杯盖后放回冰中。
4. 启动电转仪（如Bio-Rad Micropulser或GenePluser Xcell等类似设备），设置如下参数：电容=25 μF，电阻=200 Ω，电压=2.0 kV (或按所用电转仪推荐的参数操作），设置完成后取出电击杯立即使用准备好的kimwipe等无尘纸擦拭干杯外所粘水份后迅即置入电转槽中启动电击，电击完成后快速插回冰中静置5分钟。
5. 取出电击杯并加入1ml 37℃温育的培养基（推荐使用SOC培养基），混匀后转移到15ml摇菌管，并向离心管中补加培养基至3ml。37℃，250 rpm震荡1小时复苏。
6. 根据不同实验目的将上述培养基全部或部分涂布于适宜规格大小及数量的SOC琼脂平板上（如需浓缩可5000rpm离心一分钟收菌，使用恰当体积的SOC培养基重悬后涂布）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜。
注意事项
1.全程操作应轻柔，不宜吹打以避免产生气泡。
2. 当DNA存在盐等杂质污染时，容易产生电弧放电并导致转化效率急剧降低。
3. 为了提高电转效率，推荐使用高纯质粒提取盒提取质粒。
4. 为了获得最高电转效率，每次电转DNA体积不宜超过10 μl，过大体积连接产物会降低转化效率。
5. 由于电转感受态效率极高，因此在转化高浓度的质粒或连接产物调整涂板的菌量，以免克隆数过多而难以挑取单克隆。
6. 电击感受态细胞保存在-80℃以下冰箱保存（不能液氮保存），高于-80℃会导致转化效率降低。
质量控制测试
按照上述操作方法，取出2管感受态细胞，分别标记为阴性对照和阳性对照，在阳性对照管加入10pg （即1µl）pUC19对照质进行转化。后续步骤两管均进行相同操作，转化完成后使用SOC培养基按1：100稀释，每管取50µl 培养物样品涂布在 LB 琼脂板上（含100 µg/ml 氨苄青霉素）。将板在 37°C 下孵育过夜，根据平均每盘菌落数计算总转化效率。如50个克隆则对应于1X1010 cfu/μg DNA。
转化效率计算方法（CFU/μg质粒）：
CFU on control plate × 1 × 106 pg × volume of transformants × dilution
pg pUC19 DNA µg volume plated factor
附（SOC培养基组成及配制方法）
2% Tryptone
0.5% Yeast Extract
10 mM NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgCl2
10 mM MgSO4
20 mM glucose
PH~7.0
SOB培养基：
配制每升培养基，在950ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.5 g
摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。该溶液在使用前，加入5ml灭菌的2 mol/l Mg2+[2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下：称取20.33g MgCl2 6H2O以及24.65g MgSO4 7H2O，用去离子水调整体积为100ml，在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min]。
SOC培养基（SOC培养基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同）
上述SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃以下，加10ml过滤除菌的2M葡萄糖溶液(2M葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解36g葡萄糖，完全溶解后，用去离子水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌)。
本公司所售感受态细胞种类及其主要特征
| 克隆感受态细胞 | DH5α | 实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，用于质粒克隆扩增，可用于蓝白斑筛选 |
| JM109 | 实验室最常用小量提取高质量质粒的理想菌株，可用于克隆构建及扩增，蓝白斑筛选实验 | |
| TOP10 | 常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选 | |
| XL1-Blue | 可提取高纯度质粒DNA，能保证高拷贝质粒稳定复制，可用于蓝白斑筛选以及噬菌体展示 | |
| TG1 | 生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于噬菌体展示，也可用于普通质粒构建 | |
| Stbl3 | 可抑制重复片段重组丢失，是慢病毒载体推荐使用的菌株 | |
| Stable | NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株 | |
| 表达感受态细胞 | BL21(DE3) | 非毒性蛋白的高水平表达，可同时用于含T7启动子的pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达； 另外该菌株电转感受态效率可达1×1010 cfu/μg DNA，主要用于表达文库的构建 |
| BL21(DE3)pLysS | 毒性蛋白、非毒性蛋白的表达，背景表达降低 | |
| Rosetta(DE3)pLysS | 可表达毒性蛋白，pRARE质粒可补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子所对应的tRNA，可提高未经密码子优化的外源基因的表达水平 | |
| Origami(DE3) | 突变的硫氧还蛋白还原酶 (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (gor)基因有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达 | |
| Origami(DE3)pLysS | 在Origami（DE3）菌株的基础上进一步降低蛋白的泄漏表达，可用于含有二硫键的毒性蛋白和非毒性蛋白的高效表达 |
产品规格参数
DH5α： 50μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件： -80℃
保质期： 6个月
基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
产品说明
DH5α菌株是分子生物学实验室最常用的感受态细胞。该菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；另外，重组酶缺陷型 (recA)减少了插入片段的同源重组概率，保证其稳定性；lacZΔM15使DH5α可用于蓝、白斑筛选。本公司DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，保证了pUC19质粒检测转化效率>1×1010 cfu/μg DNA，可用于cDNA文库的构建。
操作方法（电穿孔法）
1. DH5α电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用热激法进行转化。质粒等DNA产物需去离子水溶解配制（避免含有酚、乙醇、盐离子、蛋白及去污剂等污染），避免使用elution buffer、tris buffer、TE buffer等含盐溶液溶解DNA，否则易导致转化效率降低及电弧放电。
2. 取一直径为0.1cm电击杯（如Bio-Rad #1652083或BTX ECM630等类似产品），插入冰中静置5分钟以充分预冷。与此同时从-80℃取出保存的DH5α电击感受态细胞，冰中5 分钟融化，随后立即加入目的DNA并用食指轻拍EP管底混匀(避免使用移液器吹打)后立即插回冰中。
3. 于一洁净操作区域使用移液器将上述感受态混合物迅速移入电击杯中，避免吹出气泡，盖回杯盖后放回冰中。
4. 启动电转仪（如Bio-Rad Micropulser或GenePluser Xcell等类似设备），设置如下参数：电容=25 μF，电阻=200 Ω，电压=2.0 kV (或按所用电转仪推荐的参数操作），设置完成后取出电击杯立即使用准备好的kimwipe等无尘纸擦拭干杯外所粘水份后迅即置入电转槽中启动电击，电击完成后快速插回冰中静置5分钟。
5. 取出电击杯并加入1ml 37℃温育的培养基（推荐使用SOC培养基），混匀后转移到15ml摇菌管，并向离心管中补加培养基至3ml。37℃，250 rpm震荡1小时复苏。
6. 根据不同实验目的将上述培养基全部或部分涂布于适宜规格大小及数量的SOC琼脂平板上（如需浓缩可5000rpm离心一分钟收菌，使用恰当体积的SOC培养基重悬后涂布）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜。
注意事项
1.全程操作应轻柔，不宜吹打以避免产生气泡。
2. 当DNA存在盐等杂质污染时，容易产生电弧放电并导致转化效率急剧降低。
3. 为了提高电转效率，推荐使用高纯质粒提取盒提取质粒。
4. 为了获得最高电转效率，每次电转DNA体积不宜超过10 μl，过大体积连接产物会降低转化效率。
5. 由于电转感受态效率极高，因此在转化高浓度的质粒或连接产物调整涂板的菌量，以免克隆数过多而难以挑取单克隆。
6. 电击感受态细胞保存在-80℃以下冰箱保存（不能液氮保存），高于-80℃会导致转化效率降低。
质量控制测试
按照上述操作方法，取出2管感受态细胞，分别标记为阴性对照和阳性对照，在阳性对照管加入10pg （即1µl）pUC19对照质进行转化。后续步骤两管均进行相同操作，转化完成后使用SOC培养基按1：100稀释，每管取50µl 培养物样品涂布在 LB 琼脂板上（含100 µg/ml 氨苄青霉素）。将板在 37°C 下孵育过夜，根据平均每盘菌落数计算总转化效率。如50个克隆则对应于1X1010 cfu/μg DNA。
转化效率计算方法（CFU/μg质粒）：
CFU on control plate × 1 × 106 pg × volume of transformants × dilution
pg pUC19 DNA µg volume plated factor
附（SOC培养基组成及配制方法）
2% Tryptone
0.5% Yeast Extract
10 mM NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgCl2
10 mM MgSO4
20 mM glucose
PH~7.0
SOB培养基：
配制每升培养基，在950ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.5 g
摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。该溶液在使用前，加入5ml灭菌的2 mol/l Mg2+[2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下：称取20.33g MgCl2 6H2O以及24.65g MgSO4 7H2O，用去离子水调整体积为100ml，在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min]。
SOC培养基（SOC培养基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同）
上述SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃以下，加10ml过滤除菌的2M葡萄糖溶液(2M葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解36g葡萄糖，完全溶解后，用去离子水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌)。
本公司所售感受态细胞种类及其主要特征
| 克隆感受态细胞 | DH5α | 实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，用于质粒克隆扩增，可用于蓝白斑筛选 |
| JM109 | 实验室最常用小量提取高质量质粒的理想菌株，可用于克隆构建及扩增，蓝白斑筛选实验 | |
| TOP10 | 常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选 | |
| XL1-Blue | 可提取高纯度质粒DNA，能保证高拷贝质粒稳定复制，可用于蓝白斑筛选以及噬菌体展示 | |
| TG1 | 生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于噬菌体展示，也可用于普通质粒构建 | |
| Stbl3 | 可抑制重复片段重组丢失，是慢病毒载体推荐使用的菌株 | |
| Stable | NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株 | |
| 表达感受态细胞 | BL21(DE3) | 非毒性蛋白的高水平表达，可同时用于含T7启动子的pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达； 另外该菌株电转感受态效率可达1×1010 cfu/μg DNA，主要用于表达文库的构建 |
| BL21(DE3)pLysS | 毒性蛋白、非毒性蛋白的表达，背景表达降低 | |
| Rosetta(DE3)pLysS | 可表达毒性蛋白，pRARE质粒可补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子所对应的tRNA，可提高未经密码子优化的外源基因的表达水平 | |
| Origami(DE3) | 突变的硫氧还蛋白还原酶 (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (gor)基因有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达 | |
| Origami(DE3)pLysS | 在Origami（DE3）菌株的基础上进一步降低蛋白的泄漏表达，可用于含有二硫键的毒性蛋白和非毒性蛋白的高效表达 |
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