产品规格参数
JM109： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃
保质期： 6个月
基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
产品说明
JM109菌株来源于E.coli K strain，是分子生物学实验室常用的感受态细胞。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验；本公司JM109感受态细胞经特殊工艺制作，保证了pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. JM109感受态细胞从-80℃取出后迅速置于冰中，待菌块融化后（5分钟内）迅速加入目的质粒或连接产物等DNA（使用量建议在0.1–50 ng之间，加入体积建议在10μl以下），用食指轻拍EP管底混匀(避免使用移液器吹打)后，立即放回冰中静置30分钟。
2. 迅即放置42℃水浴中准确热激45秒（热激时间<45秒或>60秒将显著影响转化效率），迅速轻轻放回冰中并静置2分钟。
3. 向离心管中加入900 μl不含任何抗生素的无菌培养基 (SOC或LB等，使用SOC培养基将保证菌株具有较高的转化效率)，混匀后37℃，250 rpm震荡1小时（时间过短不利于抗性基因的表达，导致转化效率降低）。
4. 如需获得所有转化克隆，可通过1000 rpm离心10分钟收菌，留取约100 μl上清后移液器轻轻吹打重悬菌并涂布到含相应抗生素的SOC或LB琼脂培养板上。如只做简单质粒扩增等操作则无需离心，吸取适量菌液直接涂布于培养板上。
5. 将平板倒置于37℃培养箱过夜培养（如进行蓝白斑筛选操作，需将平板放37℃培养至少17小时，含有插入片段的克隆呈现白色，而无插入片段的克隆呈蓝色。如差异不显著，可将上述培养板继续在4°C孵育2小时，蓝色将更加明显）。
注意事项
1. 为保证转化效率，感受态细胞需在冰中缓慢融化，且不可在冰中放置时间过长。
2. 全程操作应轻柔。
3. 转化完整质粒可不离心并减少最终用于涂板的菌量，否则克隆数过多无法挑取单克隆。
4. 感受态细胞对温度变化极为敏感，建议放置于-80°C冰箱底层，且不应频繁取出。
5. 抗性琼脂板4°C保存时间过久将导致抗生素降解（尤其对于氨苄青霉素），建议配制一周内使用的量。
质量控制测试
按照上述操作方法，取出2管感受态细胞，分别标记为阴性对照和阳性对照，在阳性对照管加入100pg （即10µl）pUC19对照质进行转化。后续步骤两管均进行相同操作，转化完成后使用SOC培养基按1：10稀释后，每管取50µl 培养物样品涂布在 LB 琼脂板上（含100 µg/ml 氨苄青霉素）。将板在 37°C 下孵育过夜，根据平均每盘菌落数计算转化效率。如50个克隆则对应于1X108 cfu/μg DNA。
转化效率计算方法（CFU/μg质粒）：
CFU on control plate × 1 × 106 pg × volume of transformants × dilution
pg pUC19 DNA µg volume plated factor
LB相关培养基的配制：
1. LB培养基的组成及配制
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
加去离子至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。高压灭菌20分钟。
2. LB 抗性筛选培养基
待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至恰当的终浓度（抗生素浓度与质粒拷贝数及所用菌株相关），摇匀后，于超净台中倒板。敞开皿盖20分钟风干冷却，4℃密封保存。
液体 LB 抗性筛选培养基，在完全冷却后加入抗生素，加入的量与固体培养基相同。
3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培养基
在尚未凝固的含 100 µg/ml Amp 的LB 琼脂（约55°C）中加入终浓度为80µg/ml X-gal以及20mM IPTG，混匀后倒板。待冷却风干凝固后使用。另外更简单的，也可在准备好的氨苄平板中央加入SOC培养基稀释好的100 µl IPTG（10 mM）以及100μl 2%的X-gal（20 mg/ml，用二甲基甲酰胺溶解）溶液，用无菌玻璃涂布器把溶液均匀涂布于整个平板表面，超净工作台上吹干即可使用，现用现制，避免长时间保持。勿将稀释前的X-gal与IPTG直接混合，否则将产生沉淀。
TB培养基的配制：
| Reagent | Quantity | Final concentration |
|---|---|---|
| Yeast extract | 24 g | 24 g/l |
| Tryptone | 20 g | 20 g/l |
| Glycerol | 4 ml | 4 ml/l |
| Phosphate buffer (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4) | 100 ml | 0.017 M KH2PO4, 0.072 M K2HPO4 |
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 12g，酵母提取物24g，甘油 4ml。溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mM KH2PO4以及720 mM K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54g的K2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。混匀后冷藏备用。
SOB及SOC培养基的配制：
SOB 培养基（每升用量）
Tryptone 20.0g
Yeast extract 5.0g
NaCl 0.5g
加入去离子水至1L充分搅拌溶解后高压灭菌20分钟，待冷却后加入10ml经0.22 μm过滤除菌的1M MgCl2+1M MgSO4溶液，备用。
SOC培养基（现用现配）：
在SOB培养基中按1：100比例（V/V）加入经0.22 μm过滤除菌的2M 葡萄糖。混匀备用。
本公司所售感受态细胞种类及其主要特征
| 克隆感受态细胞 | DH5α | 实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，用于质粒克隆扩增，可用于蓝白斑筛选 |
| JM109 | 实验室最常用小量提取高质量质粒的理想菌株，可用于克隆构建及扩增，蓝白斑筛选实验 | |
| TOP10 | 常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选 | |
| XL1-Blue | 可提取高纯度质粒DNA，能保证高拷贝质粒稳定复制，可用于蓝白斑筛选以及噬菌体展示 | |
| TG1 | 生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于噬菌体展示，也可用于普通质粒构建 | |
| Stbl3 | 可抑制重复片段重组丢失，是慢病毒载体推荐使用的菌株 | |
| Stable | NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株 | |
| 表达感受态细胞 | BL21(DE3) | 非毒性蛋白的高水平表达，可同时用于含T7启动子的pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达； 另外该菌株电转感受态效率可达1×1010 cfu/μg DNA，主要用于表达文库的构建 |
| BL21(DE3)pLysS | 毒性蛋白、非毒性蛋白的表达，背景表达降低 | |
| Rosetta(DE3)pLysS | 可表达毒性蛋白，pRARE质粒可补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子所对应的tRNA，可提高未经密码子优化的外源基因的表达水平 | |
| Origami(DE3) | 突变的硫氧还蛋白还原酶 (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (gor)基因有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达 | |
| Origami(DE3)pLysS | 在Origami（DE3）菌株的基础上进一步降低蛋白的泄漏表达，可用于含有二硫键的毒性蛋白和非毒性蛋白的高效表达 |
产品规格参数
JM109： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃
保质期： 6个月
基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
产品说明
JM109菌株来源于E.coli K strain，是分子生物学实验室常用的感受态细胞。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验；本公司JM109感受态细胞经特殊工艺制作，保证了pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. JM109感受态细胞从-80℃取出后迅速置于冰中，待菌块融化后（5分钟内）迅速加入目的质粒或连接产物等DNA（使用量建议在0.1–50 ng之间，加入体积建议在10μl以下），用食指轻拍EP管底混匀(避免使用移液器吹打)后，立即放回冰中静置30分钟。
2. 迅即放置42℃水浴中准确热激45秒（热激时间<45秒或>60秒将显著影响转化效率），迅速轻轻放回冰中并静置2分钟。
3. 向离心管中加入900 μl不含任何抗生素的无菌培养基 (SOC或LB等，使用SOC培养基将保证菌株具有较高的转化效率)，混匀后37℃，250 rpm震荡1小时（时间过短不利于抗性基因的表达，导致转化效率降低）。
4. 如需获得所有转化克隆，可通过1000 rpm离心10分钟收菌，留取约100 μl上清后移液器轻轻吹打重悬菌并涂布到含相应抗生素的SOC或LB琼脂培养板上。如只做简单质粒扩增等操作则无需离心，吸取适量菌液直接涂布于培养板上。
5. 将平板倒置于37℃培养箱过夜培养（如进行蓝白斑筛选操作，需将平板放37℃培养至少17小时，含有插入片段的克隆呈现白色，而无插入片段的克隆呈蓝色。如差异不显著，可将上述培养板继续在4°C孵育2小时，蓝色将更加明显）。
注意事项
1. 为保证转化效率，感受态细胞需在冰中缓慢融化，且不可在冰中放置时间过长。
2. 全程操作应轻柔。
3. 转化完整质粒可不离心并减少最终用于涂板的菌量，否则克隆数过多无法挑取单克隆。
4. 感受态细胞对温度变化极为敏感，建议放置于-80°C冰箱底层，且不应频繁取出。
5. 抗性琼脂板4°C保存时间过久将导致抗生素降解（尤其对于氨苄青霉素），建议配制一周内使用的量。
质量控制测试
按照上述操作方法，取出2管感受态细胞，分别标记为阴性对照和阳性对照，在阳性对照管加入100pg （即10µl）pUC19对照质进行转化。后续步骤两管均进行相同操作，转化完成后使用SOC培养基按1：10稀释后，每管取50µl 培养物样品涂布在 LB 琼脂板上（含100 µg/ml 氨苄青霉素）。将板在 37°C 下孵育过夜，根据平均每盘菌落数计算转化效率。如50个克隆则对应于1X108 cfu/μg DNA。
转化效率计算方法（CFU/μg质粒）：
CFU on control plate × 1 × 106 pg × volume of transformants × dilution
pg pUC19 DNA µg volume plated factor
LB相关培养基的配制：
1. LB培养基的组成及配制
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
加去离子至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。高压灭菌20分钟。
2. LB 抗性筛选培养基
待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至恰当的终浓度（抗生素浓度与质粒拷贝数及所用菌株相关），摇匀后，于超净台中倒板。敞开皿盖20分钟风干冷却，4℃密封保存。
液体 LB 抗性筛选培养基，在完全冷却后加入抗生素，加入的量与固体培养基相同。
3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培养基
在尚未凝固的含 100 µg/ml Amp 的LB 琼脂（约55°C）中加入终浓度为80µg/ml X-gal以及20mM IPTG，混匀后倒板。待冷却风干凝固后使用。另外更简单的，也可在准备好的氨苄平板中央加入SOC培养基稀释好的100 µl IPTG（10 mM）以及100μl 2%的X-gal（20 mg/ml，用二甲基甲酰胺溶解）溶液，用无菌玻璃涂布器把溶液均匀涂布于整个平板表面，超净工作台上吹干即可使用，现用现制，避免长时间保持。勿将稀释前的X-gal与IPTG直接混合，否则将产生沉淀。
TB培养基的配制：
| Reagent | Quantity | Final concentration |
|---|---|---|
| Yeast extract | 24 g | 24 g/l |
| Tryptone | 20 g | 20 g/l |
| Glycerol | 4 ml | 4 ml/l |
| Phosphate buffer (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4) | 100 ml | 0.017 M KH2PO4, 0.072 M K2HPO4 |
将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 12g，酵母提取物24g，甘油 4ml。溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mM KH2PO4以及720 mM K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54g的K2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。混匀后冷藏备用。
SOB及SOC培养基的配制：
SOB 培养基（每升用量）
Tryptone 20.0g
Yeast extract 5.0g
NaCl 0.5g
加入去离子水至1L充分搅拌溶解后高压灭菌20分钟，待冷却后加入10ml经0.22 μm过滤除菌的1M MgCl2+1M MgSO4溶液，备用。
SOC培养基（现用现配）：
在SOB培养基中按1：100比例（V/V）加入经0.22 μm过滤除菌的2M 葡萄糖。混匀备用。
本公司所售感受态细胞种类及其主要特征
| 克隆感受态细胞 | DH5α | 实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，用于质粒克隆扩增，可用于蓝白斑筛选 |
| JM109 | 实验室最常用小量提取高质量质粒的理想菌株，可用于克隆构建及扩增，蓝白斑筛选实验 | |
| TOP10 | 常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选 | |
| XL1-Blue | 可提取高纯度质粒DNA，能保证高拷贝质粒稳定复制，可用于蓝白斑筛选以及噬菌体展示 | |
| TG1 | 生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株之一，主要用于噬菌体展示，也可用于普通质粒构建 | |
| Stbl3 | 可抑制重复片段重组丢失，是慢病毒载体推荐使用的菌株 | |
| Stable | NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株 | |
| 表达感受态细胞 | BL21(DE3) | 非毒性蛋白的高水平表达，可同时用于含T7启动子的pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达； 另外该菌株电转感受态效率可达1×1010 cfu/μg DNA，主要用于表达文库的构建 |
| BL21(DE3)pLysS | 毒性蛋白、非毒性蛋白的表达，背景表达降低 | |
| Rosetta(DE3)pLysS | 可表达毒性蛋白，pRARE质粒可补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子所对应的tRNA，可提高未经密码子优化的外源基因的表达水平 | |
| Origami(DE3) | 突变的硫氧还蛋白还原酶 (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (gor)基因有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达 | |
| Origami(DE3)pLysS | 在Origami（DE3）菌株的基础上进一步降低蛋白的泄漏表达，可用于含有二硫键的毒性蛋白和非毒性蛋白的高效表达 |
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