（一）标准曲线及不同样本测试结果：

• （二）分析原理：
  

  焦磷酸（pyrophosphate，P₂O₇^4-，PPi）在生物体系中广泛存在且具有重要生理功能。在化学上，焦磷酸可被看作是两个磷酸分子通过脱水缩合形成的磷酸酐，是最简单的多聚磷酸形式，同ATP分子类似，其P-O-P 键能较高，称为高能磷酸键。因此焦磷酸性质不稳定，其水溶液加热可分解为无机磷酸。在生物体系中，ATP水解为AMP伴随着焦磷酸的产生，同样DNA或RNA合成亦伴随焦磷酸的产生。人体组织焦磷酸存在于关节滑液、血浆以及尿液中，可阻止羟基磷灰石形成抑制骨骼钙化。大量研究发现，ENPP1、ANK以及TNAP协同调控细胞外 PPi 水平。其中，ENPP1是一种跨膜蛋白，可水解胞外ATP产生AMP及焦磷酸；ANK则是一种离子通道，可将胞内焦磷酸泵出至胞外间液进入组织或循环体系；TNAP则是焦磷酸水解酶，可将焦磷酸降解为无机磷酸。生物样本中焦磷酸浓度主要通过酶学偶联法进行测定。我们研发的焦磷酸定量分析盒提供了一种方便快捷的方法来检测血清、组织间液及组织细胞内的焦磷酸水平。在该测定中，焦磷酸盐在磷酸烯醇式丙酮酸盐等存在下通过酶促反应转化为丙酮酸。随后可生成570 nm 处具有强吸收的有色产物，由于其吸光度与样品中存在的焦磷酸量成正比，从而可用于检测计算焦磷酸水平。

• （三）产品描述：

  本产品【焦磷酸定量分析（比色法），货号：A0012】可以用于检测生物样品中（如血清、组织液及组织裂解液等）焦磷酸的水平。血清及组织液可直接进行检测，细胞和组织样品经一步裂解后离心即可完成样品的制备，检测灵敏度高达0.5纳摩尔。另外，所获得的样品裂解液仍可进行BCA蛋白定量及Western blot检测分析等。本试剂盒具有如下特征：

  （1）样品制备简单。试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的AMP裂解缓冲液，无需进行高氯酸或者加热煮沸等去蛋白抽提等导致焦磷酸降解等影响数据。

  （2）灵敏度高，在0.5至10纳摩尔范围内有良好检测效果。本试剂盒在样品体积为100微升时可以检测浓度低达5μM的焦磷酸。如样品浓度所在区间预先未知，可进行一定稀释比例的预实验，使样本读数位于该区间范围内。

  （3）读数稳定。经优化设计，本试剂盒整体反应稳定可靠，试剂盒可开展时间动力学分析，从而获得最优的检测时间点。

  （4）较高的样品兼容性。本试剂盒中含有焦磷酸裂解缓冲液，经该裂解液获得的样品，不仅可以用于焦磷酸检测，还可用于BCA法检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE以及一些可溶性蛋白的Western blot检测。

  （5）检测方便快捷。本产品无需繁琐的样品准备及复杂的分析流程，通常20个样品可以在2小时内测定完毕（含37°C孵育1小时）。

• （四）试剂盒组成及储存条件：
  

  试剂盒组成	50 tests	100 tests	200 tests	Storage
  PPi Lysis Buffer	1 x 30 ml	1 x 60 ml	1 x 120 ml	4 °C
  PPi Assay Buffer	1 x 30 ml	1 x 60 ml	1 x 120 ml	4 °C
  PPi Developer	2 vials	4 vials	8 vials	-20 ºC
  PPi Enzyme mix	1 x 3 ml	1 x 6 ml	1 x 12 ml	-20 ºC
  PPi Probe	1 x 0.3 ml	1 x 0.6 ml	1 x 1.2 ml	-20 ºC
  PPi Substrate	1 x 1.5 ml	1 x 3 ml	1 x 6 ml	-20 ºC
  PPi Standard	1 x 0.5 ml	1 x 1 ml	1 x 2 ml	-20 ºC

• （五）分析平台及产品参数：
  

  （1）分析平台：

                  带570nm波长吸光度酶标仪，标准透明底96孔酶标板。

  （2）产品参数：

  l  产品名称	焦磷酸定量分析试剂盒（吸光度法）
  l  分析方法	吸光度法（570nm波长）
  l  分析平台	光吸收酶标仪（96孔板）
  l  有效期	12个月
  l  检测区间	>0.2纳摩尔
  l  产品货号	A0012-01（50次） A0012-02（100次） A0012-03（200次）