基于片段药物分子设计（FBDD）方法用于Rnase L抑制剂开发

在抗病毒及抗肿瘤中，细胞可通过免疫系统激活胞内核糖核酸酶L(RNase L)表达，从而切割病毒和细胞单链RNA (ssRNA)在干扰素(IFN)诱导的抗病毒先天免疫中发挥重要作用。

RNaseL是一种假激酶-内切核糖核酸酶，由三个结构域组成：一个N 端锚蛋白重复(ANK)结构域，参与2-5A（2'-5'连接的寡腺苷酸，为第二信使）结合，一个假激酶(PK)结构域参与在RNaseL二聚化中，以及切割底物RNA的C端核糖核酸酶(RNase)域。一旦检测到病毒感染，细胞就会产生I型干扰素，通过JAK-STAT信号级联反应诱导寡腺苷酸合成酶(OAS)表达。OAS然后被病毒双链RNA (dsRNA)激活，从而将ATP合成2-5A。2-5A和ATP与无活性的单体RNaseL结合并促进形成具有活性的相互缠绕的二聚体构象.最后，活性RNaseL通过切割病毒和细胞ssRNA来消除病毒成分并抑制细胞和病毒蛋白质合成，从而发挥抗病毒及抗肿瘤活性。与此同时，RNaseL同时也参与其他多种细胞生理活动，比如细胞自噬、凋亡及炎症小体形成等。在人类遗传病艾卡迪综合征（Aicardi-Goutièresyndrome, AGS）中，RNaseL被过度激活，引起神经变性和免疫炎症。因此靶向RNaseL开发化学小分子调控剂可能为多种免疫相关疾病提供潜在治疗方案。

Rnase L的活化过程

近期，北京大学深圳研究生院黄昊课题组利用基于片段的方法（FBDD）针对RNaseL进行抑制剂开发，取得成果。首先，通过酶活方法以及饱和转移差谱（STD）-NMR方法筛选并鉴定了13个活性小分子片段，经过对片段和天然产物进行结构对比，衍生获得更高活性的抑制剂分子杨梅素（Myricetin，IC₅₀=～200μM）和金丝桃苷（Hyperoside， IC₅₀=～2μM）。本研究使用核磁手段证明了杨梅素和金丝桃苷能够直接与RNaseL蛋白相互作用，并通过晶体结构揭示了杨梅素（Myricetin）的结合口袋，其工作机制是通过靶向假性激酶的ATP口袋发挥别构抑制活性。最后，在细胞水平上验证了Myricetin能够有效抑制RNaseL的剪切活性（图1）。本文验证了通过靶向核糖核酸酶RNaseL的假性激酶结构域开发其别构抑制剂的策略。同时，共晶结构显示，片段AC40357与衍生获得的天然产物Myricetin在RNaseL结合口袋内的结合模式一致，提供了一个将化合物片段衍生为天然产物抑制剂的成功例子。

基于FBDD方法开发RNaseL抑制剂及抑制机理研究

该成果以“Identificationof Small Molecule Inhibitors of RNase L by Fragment-Based DrugDiscovery” 为题，近期发表于药学期刊Journalof MedicinalChemistry，论文链接https://doi.org/10.1021/acs.jmedchem.1c01156。该研究由黄昊课题组与美国克利夫兰癌症研究中心RobertH. Silverman组合作完成，黄昊教授与RobertH.Silverman 教授为该论文的共同通讯作者；肿瘤化学基因组学省部共建国家重点实验室为第一作者单位。以上工作得到了国家自然科学基金委、深圳市科技创新委员会、美国NIHR01项目的基金的支持。北京大学北京核磁共振中心的牛晓刚博士和上海光源的周欢博士对本文提供了。

迄今为止，黄昊课题组在RNaseL的结构生物机制和化学调控研究领域取得了一系列的重要进展（图2），包括通过晶体衍射首次解析了RNaseL的全长二聚体晶体结构（Huanget al. MolCell.2014），揭示了RNaseL的抗病毒先天免疫激活机制。2020年，课题组使用生物物理和生物化学等手段解析了抗癌药物激酶抑制剂Sunitinib及其衍生物抑制RNaseL的结构机理，提出靶向RNaseL假性激酶结构域中的ATP结合口袋，破坏RNaseL活性二聚体的稳定性，是别构调节其核糖核酸酶活性的有效方法（Tanget al. BiochemJ.,2020）。同年，课题组和加拿大及美国研究团队进行合作，用激酶专属抑制剂库针对RNaseL筛选高活性抑制剂，成功筛选并鉴定获得纳摩尔水平抑制活性的抑制剂鞣花酸（Ellagicacid，EA）和瓦隆酸双内酯（Valoneicacid dilactone, VAL）。其中VAL能够逆转ADAR1缺失导致内源双链RNA激活OAS-RNaseL系统引起的细胞死亡。该研究为使用小分子抑制剂调控RNaseL功能及靶向RNaseL治疗AGS奠定基础（Daouet al. PNAS.2020）。

黄昊课题组在RNaseL的结构生物机制研究及其化学调控做出系统工作

参考文献：

Identificationof Small Molecule Inhibitors of RNase L by Fragment-Based DrugDiscovery. Jinle Tang#,Beihua Dong#, Ming Liu, Shuyan Liu, Xiaogang Niu, Christina Gaughan,Abhishek Asthana, Huan Zhou, Zhengshuang Xu, Guoliang Zhang, RobertH. Silverman*, Hao Huang*, J.Med. Chem. inpress: https://doi.org/10.1021/acs.jmedchem.1c01156